干货指南|动物临床诊断技术上篇

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此篇中我们主要介绍小鼠的初级临床检测，包括外表观察、体温及粪尿检测的方法。精彩内容马上开始~



外表观察
通过对外表的细致观察描述，可以发现大量存在潜在异常的组织器官，因此应尽量使用统一而系统的形态异常检测指标进行描述，以增加结果的可比较性。对小鼠的外表形态而言，一般通用的观察顺序为：
〈一〉大体描述；
〈二〉毛发；
〈三〉头部；
〈四〉四肢；
〈五〉腹部。
下面我们将针对这几个方面详细说明[1]。

1、大体描述
小鼠外形的大体描述包括体重、身长、尾长的测量，以判断小鼠是否存在短小 (undersized)、过胖 (fat)、过瘦（thin）等体型异常，同时观察其背部的拱起情况，描述是否存在佝偻 (hunched)。同时可能存在的还有不同位置的肿块或水肿（masses or swellings）。



正常小鼠，毛有光泽且顺，眼睛炯炯有神



弓背、毛竖立、眯眼，典型的病鼠外观

通过观察处于静止及自然活动下的小鼠，可能发现的异常有：呼吸异常（abnormal breathing），如哮喘（asthma）；头部的过度抖动（shake）或震颤（tremor）；异常的安静（inactive）或躁动不安（aggressive）；跑动过程中步态改变（gait change）；拖尾（straub）或翘尾（lifted）；打转（circling）或倒退（gear）等。以上的异常描述作为大体表型观察的部分内容，可以对小鼠的代谢系统、呼吸系统及神经系统等可能存在的异常提供支持依据。

皮毛
小鼠的皮肤包括耳廓、鼻周、四肢掌部及尾部这些没有被毛覆盖的区域，其余部分为毛。皮毛可能存在的异常包括：毛发全部或局部稀少（hair loss）；毛发全部或局部完全脱落（alopecia）；部分毛色或皮肤颜色改变（coat color change）；立毛（ruffled）；毛发污染（如油脂分泌过盛等）（fur staining）；皮肤硬化（thick skin）；皮肤过薄（thin skin）；胡须过长、过短或过弯等。


皮毛的异常脱落通常与代谢及免疫系统紊乱有关。皮肤的异常伤口表明小鼠有打斗特性（fight wounds），溃烂或尾部溃烂也可能与饲养环境及微生物感染有关。

头部
头部和五官的异常存在于很多突变品系中。
头部异常一般为头大小（head size）异常，如头小（small head）、头短（short head）、脑水肿（hydrocephalus）、单侧膨大等，因为不同品系小鼠头部形态不同，以与对照小鼠比较能明显看出差异为准。



右边小鼠患有脑积水

五官中除眼部以外，典型异常包括：口水过多（drooling）、口水过少（less salivation）、牙长（overgrown teeth）、牙本质颜色改变、鼻尺寸偏大、流涕（nasal discharge）、小耳（small ear）、耳毛形态改变等。
眼部特征改变的情况较多，如无眼、小眼、眼混沌、眼睑发炎、瞳孔偏位、瞳孔过大或过小、流泪、单侧或双侧眼睛突出等等。


四肢
四肢观察重点在于肢体的长度、位置、形态，指部的个数、形态、尺寸及指垫的个数。通常可能存在的异常包括：四肢短小、关节移位、四肢弯曲、后肢或四肢指头个数增加或减少、指部过短、过胖或过长、指垫数量减少等等。四肢形态异常通常与胚胎肢端发育或骨骼系统发育异常有关。


腹部
与对照小鼠比较腹部的大小可能发现腹部的异常肿大（enlarged abdomen），对小鼠腹部的轻轻按压可以感觉到潜在的肿块或由于腹水而不能立刻回弹的问题。观察生殖器外观也可以得到其尺寸、形态方面的信息。
2、体温
小鼠的体温和生理节律有很大的相关性，因此需要记住，为确保结果的可比性，必须在每天相同时间做检测。
传统的较为简便测量小鼠体温的方法是直肠肛温测量。此方法检测手段简单、设备易于准备而应用较广。但直肠肛温测量对检测人员的操作要求较高，结果会由于温度计插入的深度不同而产生波动，因此结果的准确性往往不够理想。
结果示例：



测量小鼠体温，使用天津今明仪器有限有限公司 JM624u体温计

3、粪尿检测
小鼠的尿液由于浓缩程度高，量少所以收集较困难，主要成分和浓度与收集尿液时小鼠的受惊吓程度有关，所以难以稳定地用于生化检测，普适程度较低。粪便主要可用于肠道菌群培养鉴定，判断小鼠的肠道微生物组成及营养状态。

尿液收集
小鼠无创情况下的尿液收集一般有以下几种方式：
1. 完全自由排尿，将小鼠放在铺有塑料薄膜的封闭空间里注意观察，当其排尿后用洁净的枪头吸取尿液并累积。可以在一整张塑料薄膜上同时将多只小鼠用硬纸板隔开，同时收集尿液，达到所需要的量为止。


2. 按压腹部排尿，一般需要两个人配合完成。一个人轻柔地抓取小鼠，并适度按压膀胱位置的腹部，小鼠一般会主动排尿，另一个人用洁净的EP管收集尿液。这种方法因为操作简单而比较常用，缺点是收集尿液的量不能随意控制。
3. 反射排尿，把小鼠的尾巴拎起来，使其处于倒立状态，在这种体态下，小鼠会自行排尿，用合适的管子接取。
除以上方法外，还有膀胱穿刺等有创的方法，但使用并不普遍。

粪便采集
小鼠的粪便采集一般使用代谢笼，在正常的生理情况下自然收集粪便，可以与进食量综合用于分析小鼠摄食排泄功能。在压迫条件下新鲜分离的粪便可用于常见细菌培养，多用于兽医对小鼠肠道功能紊乱等疾病分析。



需要注意的是，不同年龄、品系背景的小鼠，检测指标的标准值是不同的，因此对于纯背景的突变小鼠，需要以相同品系背景、年龄性别和饲养条件的小鼠作为对照，对于非纯背景小鼠，检测的指标值在组内可能存在较大差异，此时使用同窝同性别小鼠作为对照是必要的。
同时，量化指标需要有足够数量小鼠的检测结果来保证差异的可靠性，一般需要5对以上的小鼠来确定一个稳定的异常表型特征。

以上的内容希望可以帮助到大家~
下篇有关小鼠血液的内容非常全面、清晰。
我们下篇干货见！


参考文献
(1) Handbook of Clinical Signs in Rodents and Rabbits. Kathlean R. et, al. 2nd Edition, Charles River Laboratories.

本文撰写：齐心
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